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易于引起Pcr实验室污染四种关键因素概述

Pcr实验室*为普遍关键的污染因素,中海生物技术小编总结有下述四方面:

因素①Pcr试剂污染

关键因素是在配制Pcr试剂的过程中,样品枪/容器/双蒸水等溶液被Pcr核酸模板污染。

因素②Pcr扩增产物污染

它是Pcr反应中*重要并是*普遍的污染因素。毕竟Pcr产物的大拷贝量大概为1013拷贝/毫升,大大超过Pcr检测几个拷贝的极限,极少量的Pcr产物就能引起假阳性,产生假阳性。

另一种易于被忽略且*有可能导致Pcr产物污染的形式是气溶胶污染。当空气摩擦液体表面时,会产生浮质。当实际操作中剧烈摇动反应管时,开启盖子,吸取样品,用污染注射枪反复吸取样品,会产生气溶胶并被污染。据测算,一个气溶胶粒子可以包含48,000个拷贝,所以它引起的污染是一个需要特别留意的问题。

因素③标本之间的交叉污染

标本的污染主要包含采集标本的容器被污染,或标本置放时因密封不严而溢出容器外,或容器外有标准本粘着,引起标本之间的交叉污染;核酸模板提取过程中,加样枪污染导致样本间污染;部分微生物标本,尤其是病毒,可以随气溶胶传播或产生气溶胶,引起相互污染。

因素④克隆质粒的污染

此问题在分子生物学实验室和部分克隆质粒作为阳性对照的实验中也很普遍。由于单位体积克隆质粒的含量相当高,再加上纯化过程需要更多的工具和试剂,活细胞中的质粒因其生长繁殖的简单性和活力,很可能被污染。

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