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一步法与传统ELISA的区别

一、夹心法根据操作步骤又分为一步法、两步法、三步法,三者之间的区别归纳如下:

二、ELISA竞争法和夹心法的区别:

竞争法(competitive ELISA):

小分子抗原或半抗原因缺乏可作夹心法的两个以上的位点,因此不能用双抗体夹心法进行测定,可以采用竞争法模式。其原理是标本中的抗原和一定量的酶标抗原竞争与固相抗体结合。标本中抗原量含量愈多,结合在固相上的酶标抗原愈少,的显色也愈浅。


优点:适用于小分子抗原,数据再现性很高。


缺点:整体的敏感性和特异性都较差。

夹心法(sandwich ELISA):


被检测的抗原包被在两个抗体之间,其中一个抗体将抗原固定于固相载体上,即捕捉抗体。另一个则是检测抗体,此抗体可用酶标记后直接测定抗原的量;或不标记,再透过酶标记的二抗体来测定抗原的量。这两种抗体必须小心选取,才可避免交互反应或竞争相同的抗原结合部位。


优点:高灵敏、高特异性,抗原无须事先纯化。


缺点:抗原一定得拥有两个以上的抗体结合部位。


 竞争法和夹心法的相同点:两种方法都是检测抗原物质。


  不同点:竞争法是用于检测小分子抗原物质,只有一个反应位点,没法用夹心法方法检测。而大分子抗原更适用于夹心法(也可以用竞争法),因为夹心法实验结果特异性和灵敏度更好。

注意:不同物质的适用原理可能不同,所以并没有说竞争法的一定比夹心法做的结果好,同样夹心法的也不一定比竞争法的结果好。我根据不同项目用方法的盒子。

三:即用型标准品(稀释好的液体标准品)和高浓度单试剂标准品(粉剂标准品)的优劣势


即用型:

优势:使用更加方便,拆开即用不需要再另外稀释,使用线性会更好


劣势:保存时间比较短,稳定性容易受保存条件和时间的影响


粉剂标准品: 


优势:保存时间更长,试剂稳定性更好,可根据需求配置自己的需要的标准浓度


劣势:需要自己稀释线性浓度,操作比较麻烦,稀释线性容易出现问题

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