酶联免疫吸附测定试剂盒是酶免疫测定中广泛应用的技术。基本方法是将已知的抗原或抗体吸附到固相载体的表面，使酶标记的抗原和抗体在固相表面反应，并用洗涤法洗去液相中的游离成分。常用的ELISA酶联免疫吸附法包括双抗体夹心法和间接法。前者用于检测大分子抗原，而后者用于检测特异性抗体。
酶联免疫吸附测定试剂盒法的基本原理是酶分子与抗体或抗抗体分子共价结合，不改变抗体的免疫特性或影响酶的生物活性。这种酶标记的抗体可以特异性地结合抗原或吸附在固相载体上的抗体。滴加底物溶液后，底物可以在酶的作用下将其氢供体从无色还原形式变为有色氧化形式，从而产生显色反应。因此，相应免疫反应的存在与否可以通过底物的显色反应来确定，并且显色反应的深度与样品中相应抗体或抗原的量成比例。这种颜色反应可以使用酶联免疫吸附测定试剂盒检测器进行定量测量，该试剂盒检测器将酶化学反应的敏感性与抗原抗体反应的特异性相结合，使酶联免疫测定试剂盒方法成为一种特异而灵敏的检测方法。
酶联免疫吸附测定试剂盒操作步骤
1.确定本试验所需的酶联抗体涂层孔的数量。
2.将0.1ml稀释的标准样品依次加入一排7孔中，每孔只加入样品稀释液作为对照。处理后，每孔添加100μl样品。
3.在酶联板上加一个盖子，在37℃下反应90分钟。
4.反应结束后，使用自动洗板机将液体从酶标板上去除；或者，抖掉酶联板上的液体，在吸水纸上拍几下。清洗两次。
5.按每孔0.1ml的顺序加入制备的生物素抗体工作液。在37℃下反应60分钟。
将6.0.01M TBS或0.01M PBS洗涤3次，每次浸泡约1分钟。
7.按每孔0.1ml的顺序加入制备好的ABC工作溶液。在37℃下反应30分钟。
用8.0.01M TBS或0.01M PBS洗涤5次，每次浸泡约1-2分钟。
9.依次向每个孔中加入0.1ml TMB显色工作液，在37℃下进行暗反应。在反应过程中，有必要定期观察。当标准样品的前3-4孔具有肉眼可见的清晰的蓝色梯度，并且最后3-4孔之间的差异不显著时，可以添加0.1ml/孔的TMB终止溶液。（显色反应不应超过30分钟）。
10.使用酶联免疫吸附测定法在450nm处测量O.D.值。
11.根据样品的吸光度值，在坐标中找到相应的浓度。用户还可以使用各种应用软件进行计算。需要记住的是，由于样品稀释了N倍，实际浓度应为×N