免疫染色包括免疫荧光（IF）、免疫组织化学（IHC）、免疫细胞化学（ICC）等。您可以参考以下步骤进行操作。
样品制备
对于粘附细胞：
可以使用多孔板（例如6孔板、24孔板）直接培养细胞，然后在预定时间固定以进行后续操作。
你也可以使用一个干净的盖玻片，将其浸泡在70%的乙醇中，用无菌镊子将其放置在6孔板中，然后用无菌盐水、PBS或培养液冲洗掉剩余的乙醇。此时，可以种植细胞进行培养。在细胞附着在盖玻片上并生长良好后，可以进行后续操作，如固定。
对于悬浮细胞：
细胞首先固定在固定溶液中，然后滴到载玻片上。干燥后，细胞紧紧地粘附在载玻片上。然后可以继续进行后续操作。如果细胞的粘附能力较差，则可以在载玻片上处理诸如PDL之类的物质以增强载玻片的粘附能力。
对于冷冻切片：
在将切片放置在载玻片上之后，可以直接执行诸如固定之类的后续操作。
对于石蜡切片：
脱蜡：切片在二甲苯中脱蜡5分钟，然后用新鲜的二甲苯代替进行脱蜡。二甲苯共用于脱蜡3次。无水乙醇5分钟，两次。90%乙醇5分钟，两次，70%乙醇5分钟一次。蒸馏水5分钟，两次。
抗原修复：根据不同的抗原和抗体，您可以选择将切片放置在以下抗原修复溶液中：10mM柠檬酸钠，pH6.0，或1mM EDTA，pH8.0，或10mM Tris，pH10.0，在95℃下加热12分钟，并在约30分钟内缓慢冷却至室温。
固定的
细胞或切片可以使用适当的固定溶液固定，例如BIOLEBO（YT086）的免疫染色固定溶液。固定后，可以使用免疫染色洗涤剂（YT089）清洗两次，每次5分钟。
关
加入免疫染色封闭溶液（YT087）并封闭60分钟。如果背景较高，可以在4℃下密封过夜。
在从密封开始的所有步骤中，重要的是要注意样品的水分含量，避免干燥，否则极易产生高背景。
在整个免疫染色过程中，我们建议使用侧摆振动器。侧摆速度相对较慢，也很容易让溶液覆盖样本。如果样品相对容易脱落，也可以将所有步骤放在桌面上进行静态操作，即密封、抗体孵育、洗涤和其他步骤而不摇晃，但建议在静态操作期间适当延长动作时间或次数。
*抗体孵育
参照*抗体说明书，用免疫染色*抗体稀释剂（YT088）按适当比例稀释*抗体。
用微型台式真空泵吸走密封液，立即加入稀释后的*抗体，在室温或4℃下，在侧摆摇壶上缓慢摇一摇，孵育一小时。如果*抗体孵育一小时的效果不理想，可以在4℃下慢慢摇晃，孵育过夜。
回收*个抗体。加入免疫染色洗涤剂，在侧摇台上缓慢摇晃5分钟。吸收所有洗涤液后，加入洗涤液并洗涤5分钟。总共清洗3次。如果结果背景较高，则可以适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。
二次抗体孵育
参照第二抗体的说明书，用免疫荧光染色第二抗体稀释剂（YT090）以适当比例稀释荧光标记的第二抗体，或用免疫荧光着色（非荧光）第二抗体稀释液（YT091）稀释辣根过氧化物酶（HRP）、生物素或碱性磷酸酶（AP）标记的第三抗体。
用微型台式真空泵吸出洗涤液，立即加入稀释后的第二抗体，在室温或4℃下，在侧摆摇床上缓慢摇动，孵育1小时。
回收第二种抗体。加入免疫染色洗涤剂，在侧摇台上缓慢摇晃5分钟。吸收所有洗涤液后，加入洗涤液并洗涤5分钟。总共清洗3次。如果结果的背景较高，则建议适当延长洗涤时间并增加洗涤次数。