非洲猪瘟（ASF）是一种发病率和死亡率都很高的急性和严重传染病，给养猪业造成了巨大损失。由于变异毒株的存在，血清抗体的检测和监测以及病原体检测在非洲猪瘟的诊断和监测中具有同样重要的作用。本指南旨在指导和规范非洲猪瘟病毒（ASFV）抗体的检测和监测。
1、 猪血取样要求
1.日常监测：不少于30个大型养猪场（存栏生猪2000头以上）；不少于20个中型养猪场（500-2000头生猪存栏）；不少于10个小型养猪场（存栏生猪少于500头）。
2.应急检测：根据实际需要确定样本数量。
2、 样品制备
非洲猪瘟抗体的检测样本为猪血清或猪血浆。尽量使用新鲜采集的血清或血浆样本。试样可在2-8℃下保存5天，需要转移至-20℃或更低温度的环境中长期保存。严重污染或严重溶血的样品不能用于检测；如果血清或血浆样品混浊，离心后应取上清液进行检测。
3、 仪器和设备
微量移液管（12通道或8通道可调移液管，单通道可调吸液管）和吸头，恒温培养箱，ELISA洗板器（可使用移液管手动洗板），酶标记，样品稀释板。
4、 试验方法
非洲猪瘟病毒抗体的检测方法主要包括非洲猪瘟间接ELISA抗体检测和非洲猪瘟阻断ELISA抗体检测。这两种方法都可用于检测非洲猪瘟病毒的抗体。
5、 操作程序
（1） 非洲猪瘟病毒间接ELISA抗体检测方法（以非洲猪瘟ELISA抗体检测试剂盒为例）
1.主要部件
包括非洲猪瘟病毒抗原包被板、样品稀释剂、10倍洗涤液（使用前用超纯水稀释10倍）、ASFV-HRP标记抗体、TMB底物溶液、终止液、阳性对照血清、阴性对照血清、样品稀释剂板和封板膜。
2.操作步骤
（1） 取出所有部件，在室温（25±3℃）下放置至少60分钟，然后恢复至室温。
（2） 将样品稀释50倍。向稀释板的每个孔中加入245uL样品稀释剂，向每个孔中添加5uL血清或血浆样品，并充分混合。禁止稀释阳性对照血清（PC）和阴性对照血清（NC）。
（3） 将100uL稀释样品加入抗原包被板的孔中。
（4） 向指定孔中加入100uL未稀释的阴性对照血清（NC）和阳性对照血清（PC）。
（5） 盖上密封膜，在室温（25±3℃）下孵育30分钟（±2分钟）。
（6） 使用ELISA洗板器或微量移液器清洗板。丢弃孔中的液体，向每个孔中加入300uL的一次洗涤溶液，并洗涤三次。最后一次洗涤后，将抗原涂层板轻轻地拍在吸水纸上晾干。严禁在每个步骤之间干燥孔板。
（7） 向每个孔中加入100uL ASFV-HRP标记的抗体。
注：从瓶中倒出的HRP标记抗体不得再次放入瓶中，以防止HRP酶被污染并降低其活性。
（8） 盖上密封膜，在室温（25±3℃）下孵育30分钟（±2分钟）。
（9） 重复步骤（6）。
（10） 向每个孔中加入100uL TMB基板溶液。
（11） 在室温（25±3℃）下培养15分钟（±1分钟）。
（12） 向每个孔中加入50uL终止溶液以终止酶促反应。
（13） 在450nm波长下测量吸光度值。
（14） 结果判断和计算。
3.确定
（1） 实验建立条件
阳性对照组OD450nm平均值>0.8；
阴性对照中OD450nm的平均值小于0.2；
如果测试结果不在规定范围内，则应再次进行测试。
（2） 计算方法
阳性对照（PC）OD平均值=（PC1+PC2）/2
阴性对照（NC）OD平均值=（NC1+NC2）/2