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传统支原体检测方法

支原体会对细胞培养造成严重危害。同时,其发生率高,不易用肉眼察觉。据报道,在细胞培养室中,其平均发病率甚至可以高达63%。在生物制品中,其发病率为1%-3%。
有五种可能污染细胞的支原体来源:
1.环境
2.受污染的细胞
3.携带人体表面(如嘴、鼻子、皮肤等)
4.实验试剂,如培养基、胰蛋白酶等
5.实验室仪器未彻底消毒
支原体检测的传统方法是什么?
方法1:培养法。直接将待测样品涂覆在支原体的液体或固体培养基上,使其生长。通常,需要几个星期才能看到*液体变浑浊或*菌落生长。培养法是支原体检测最经典的方法。其优点是:灵敏度适中,结果可靠。然而,培养方法的主要缺点之一是时间周期太长,不能用作细胞污染的快速检测方法。
方法2:DNA荧光染色。荧光染料(如Hoechst 33258,DAPI)可以与细胞和支原体的DNA结合。被支原体污染的细胞染色后,如果细胞核外和细胞周围能看到许多大小均匀的荧光点,即支原体的DNA,则证明存在支原体污染。该方法比培养法快,但灵敏度差。当通过荧光染色检测到支原体时,去除支原体相对困难。
方法3:扫描电子显微镜。拍摄细胞样本的扫描电子显微镜照片。如果被支原体污染,细胞表面可以看到密集的小颗粒。这种方法不适用于常规实验室测试,因为它使用电子显微镜。
方法4:PCR。PCR相对快速和灵敏。这是目前实验室中最常用的支原体检测方法。然而,PCR方法也有其致命的缺点:细胞培养基的上清液中经常含有强烈抑制PCR扩增的代谢物。由于许多研究人员直接使用细胞培养液的上清液进行PCR检测,如果检测结果为阴性,则认为没有支原体污染。事实上,还有一种可能性是,PCR的扩增受到细胞代谢产物的抑制,而不是没有支原体污染!
一般来说,应丢弃受污染的细胞,以避免成为污染源。但对于珍贵的细胞,可以使用Minerva Biolabs的Mynox®或Mynox Gold®过去,其他品牌的支原体清除剂只是抑制剂,抑制了支原体的DNA合成和蛋白质合成,但无法杀死。Mynox®是市场上*具有杀灭效果的清道夫。它是从枯草芽孢杆菌中提取出来的,可以特异性地与支原体膜结合,破坏膜的通透性,导致支原体的扩张和破裂并死亡。使用Mynox®通常,清洁任务可以在2-3小时内完成。
Mynox Gold®是Mynox®,经过四个疗程治疗。每个疗程是一代细胞。它包括Mynox®,还含有复合*成分。过去,其他品牌的支原体清除剂只是支原体的*成分,但也容易产生耐药性。Mynox Gold®Mynox®与*相结合,它结合了两者的优点,并消除了两者的缺点,因为某些细胞对Mynox®治疗敏感,而Mynox Gold™比Mynox®更温和,对细胞毒性小,因此更适合脆弱和营养不足的细胞。

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