猪瘟是中国主要的动物疫病。我国对猪瘟的防控主要采取猪瘟疫苗免疫策略,抗体检测是评价免疫效果的主要手段。目前,世界动物卫生组织推荐的猪瘟抗体检测方法为ELISA检测法和荧光抗体中和试验。荧光抗体中和试验对试验条件和操作人员要求高,耗时长。它只适合专业实验室检测少量样本,不适合推广应用。因此,可以说,ELISA是国际公认的*适合大规模应用的猪瘟抗体检测方法。
在评估ELISA检测方法时,两个最重要的指标是敏感性和特异性,两者之间存在一定的矛盾。当检测方法的灵敏度高时,它必然会失去某些特异性;同样,当特异性要求高时,它必然会失去一些敏感性。因此,对于一个好的检测方法,我们必须找到灵敏度和特异性的*平衡点和结合点。目前,用于猪瘟抗体检测的ELISA方法主要有阻断ELISA和间接ELISA两种原理。阻断ELISA使用单克隆抗体,因此检测的特异性更高;间接ELISA更注重敏感性。
阻断ELISA和间接ELISA在实际应用中都是合理的。然而,鉴于我国猪瘟大规模强制免疫的现状,如何在不同应用领域选择合适的试剂盒成为一个重要问题。因此,本文主要介绍了间接ELISA试剂盒与进口阻断ELISA试剂盒在临床应用中的比较研究,以帮助读者在实际生产中选择更合适的检测试剂。
试剂盒开发原则的差异
阻断试剂盒基于液相阻断原理,反应孔的颜色与血清中的抗体含量成反比。阻断ELISA使用单克隆抗体检测,可以大大提高检测的特异性,但实际检测对象仅针对具有单一表位的抗体(作为特异性抗体检测)。因此,当阳性血清中针对该表位的抗体的丰度不高时,检测的灵敏度会降低(会出现假阴性结果)。
间接试剂盒基于间接ELISA原理。反应孔的颜色与反应板中结合的特异性抗体的量成正比。因为间接ELISA检测针对抗原蛋白的多克隆抗体(猪体内的总抗体),它将提高检测的灵敏度。
两种试剂盒与荧光抗体病毒中和试验的符合率分析
荧光抗体病毒中和试验(FVNT)是OIE推荐的方法,也是检测猪瘟抗体的“金标准”。一项临床试验表明,两种ELISA抗体检测试剂盒检测结果不同的283份血清样本均通过FVNT法进行了确认和测试。结果表明,间接试剂盒与FVNT的符合率为69.26%,阻断试剂盒与FVNT的符合率是28.62%。不符合样品的确认结果表明,直接试剂盒能够更真实地反映接种后的中和抗体水平,而阻断试剂盒对阳性血清的检测有明显的遗漏。