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关于布鲁氏菌虎红平板凝集试验细节问题
虎红平板凝集试验（Rose Bengal test）是布鲁氏杆病血清学诊断的经典初筛试验。
OIE《陆生动物诊断试验与疫苗手册》规定虎红平板凝集实验的主要
步骤
《陆生动物诊断试验与疫苗手册》规定虎红平板凝集实验的主要步骤
（1） 试验前首先将抗原、待检血清样品及阴阳性对照血清平衡至室温（22±4℃）。整个实验要求在室温（22±4℃）下进行。必须将抗原及血清平衡至室温，否则会降低试验的敏感性。
（2）吸取 25-30µL 血清样品至“白色背景”的瓷砖、釉或塑料材质的反应板上。
（3）轻柔振摇虎红抗原试剂瓶，使其均质，吸取等体积的抗原加至靠近血清样品的白色背景的反应板上。
（4）用洁净的玻璃或塑料棒将血清与抗原“迅速同时混匀”形成 2cm 直径的圆形或椭圆形。在 OIE
布鲁氏菌病参考实验室，使用虎红专用混匀设备，将血清和抗原混匀成圆形，一次可同时混匀 48 个血清样品。OIE
要求所有血清样品及抗原需同步混匀，并形成 2cm 直径的圆形或椭圆形。
（5）置 3D（圆形）或 2D（椭圆形）混匀器混匀 4min；混匀“4min 立即”观察结果。
（6）判定结果：白色背景、自然光下观察，严禁在任何灯光下观察，出现“肉眼可见凝集现象”者判为阳性。
（7）每次实验必须设置阴阳性对照血清，且 OIE 规定“阳性对照血清要求为弱阳性（+或++）”（见下图）,便于弱阳性血清样本的判别以降低假阴性的误判，进而用试管凝集试验复检。
国标 GB/T18646-2002 《动物布鲁氏菌病诊断技术》主要步骤
（1）国标中未明确规定实验环境温度；而 OIE 对环境温度严格要求。
（2）国标中血清及抗原加样于玻璃板上，结果判定在玻璃板上进行，并非白色背景。
（3）国标中使用牙签类小棒将血清和抗原“逐个”混匀成椭圆形，一次最多只能做 10 个血清样品，而且很难做到同步混匀。
（4）国标规定混匀“4min 内”观察结果。 （5）国标中未对阴阳性血清的凝集结果进行要求，仅说明“在阴阳性血清对照实验成立的条件下，对被检血清进行判定”。 |
