自2020年10月，上海快灵发布“非洲猪瘟高灵敏度PCR试剂盒”（以下简称高灵敏度试剂盒）以来，其突出的灵敏度、敏感性、特异性和稳定性迅速得到了广大猪场实验室的认可。随着荧光PCR相关技术的普及和用户群体的增加，一些以前不被重视的问题逐渐出现。在本文中，我们将讨论“假阳性”问题，这是所有制造商都没有意识到的一点，以及相应的解决方案。
事实上，“假阳性”问题在荧光PCR领域并不少见，假阳性的原因也很复杂：如操作不当污染、环境气溶胶污染或试剂生产过程污染。本文要讨论的“假阳性”主要是指试剂特异性导致的假阳性。换句话说，本文中提到的“假阳性”与操作者、仪器和环境无关，只与试剂盒中的试剂有关。那么，试剂盒中的“假阳性”与什么有关呢？在整个商业化的非鼠疫病毒PCR检测试剂盒中，都会提到一个重要的参数——特异性。
什么是特异性？在PCR扩增过程中，如果我们要扩增的非洲猪瘟DNA片段在整个DNA链上出现不止一次，或者样本中混合的其他物种、细胞或病毒的DNA含有类似的DNA片段，那么其他片段可能会被扩增。那么仪器显示的阳性结果不一定是由非经典发热病毒DNA引起的，因此阳性结果也变成假阳性。因此，一般来说，特异性反应是试剂盒扩增特定DNA片段的性能。特异性越低，试剂盒扩增其他片段的概率越大，即“假阳性”的概率越高。
在市场上销售的许多非瘟疫病毒PCR检测试剂盒中，大多数制造商将其试剂盒的特异性标记为>99%，至少不低于98%。快灵的高灵敏度试剂盒也是如此，其特异性可达99.9%。确实已经达到了极限。尽管PCR技术已经发展到目前为止，但由于模板DNA的不确定性，仍无法保证*的特异性。因此，特异性的问题，即假阳，被忽视了。
在为客户服务的过程中，我们发现，很多客户在非瘟疫病毒检测中遇到极弱样本或疑似样本时，对于阳性领域往往遵循“杀错不放过”的原则，而对于阴性领域，往往会带来心理恐慌，需要确认是否阳性。事实上，随着非瘟疫浪潮的到来，每个测试单元的工作量前所未有地翻了一番。再次进行全面审查显然是对人力和成本的巨大考验。面对如此大的环境，快灵人陷入了沉思。
“为什么我们宁愿杀错人？”
“真的没有办法消除假阳吗？”
有了这样一个问题，我们开始了新一轮的尝试：提高试剂盒的灵敏度，将特异性从99%提高到99.9%……也许我们可以拓宽视野，超越简单的扩增？