将抗原呈递细胞、抗原和抗原特异性T杂交瘤细胞混合并在96孔板中一起孵育。一段时间后，抗原呈递的作用可以通过测量上清液中抗原特异性T杂交瘤细胞分泌的IL-2水平来反映。如果是可溶性抗原，可选择DC作为APC；如果是颗粒抗原或脂质包衣抗原，则应选择巨噬细胞作为APC，所选APC应具有与T杂交瘤细胞相同的MHC结合特性。
主要试剂和设备
1.APC（此处选择腹膜渗出细胞）、T杂交瘤细胞、抗原。
2.DMEM培养基，96孔平底培养板。
3.IL-2 ELISA试剂盒
4.离心机、CO2培养箱。
操作步骤
1.收集腹膜渗出细胞，用DMEM×106/ml将细胞浓度调节至2，加入96孔平底培养板中，每孔100μl
2.收集新鲜培养的T杂交瘤细胞，并在室温下以1000rpm离心10分钟。用预热至37℃×106/ml的DMEM培养液将细胞浓度调节至2加入96孔培养板，每孔50μl
3.制备1mmol/L抗原工作液，用DMEM溶液连续稀释，一般以对数（1:10）或半对数（1:3.16）稀释为宜。
4.向96孔板中加入一系列稀释的抗原溶液，每孔50μl每种浓度进行三次再穿孔，阴性对照不含抗原。
5.将96孔板置于37℃的5%CO2培养箱中20~24小时。
6.取出96个孔板，以1200rpm离心10分钟。
7.吸取上清液，在-80℃冷冻测试，或直接使用IL-2 Elisa试剂盒或细胞生物学方法检测上清液中IL-2的含量。
注意事项
1.制备抗原溶液并进行连续稀释时，应将培养板置于37℃培养箱中。
2.当合成肽用作抗原时，肽应溶解在去离子水中。1mmol/L工作溶液在4℃下可储存数天。应避免将肽溶解在盐水缓冲溶液中，因为盐会导致肽沉淀。如果将蛋白质用作抗原，可将蛋白质直接溶解在DMEM培养基中以立即使用。
3.APC、抗原和T杂交瘤细胞可以以任何顺序加入。