间接法原理
样品中待测抗体与固相抗原结合后，使用酶标记和抗体（抗人Ig）进行检测。
一种测定抗体的简易ELISA方法。病原体或其他外来大分子进入人体后会刺激机体产生相应的抗体，因此可以通过检测某种病原体的相应抗体来确定机体是否已被某种病原体感染，从而达到诊断的目的。
间接法是测定抗体最常用的方法。在这种方法中，已知的定量抗原（例如病原体的蛋白质）首先被固体载体吸附（也称为涂层）（在微孔滴定板的微孔中），然后添加到待测样品中（如果患者的血清中含有相应的抗体，则为*抗体）并与其结合。孵育反应时间。此时，如果血清中含有针对病原体蛋白的抗体（*抗体），则抗体将与固相抗原特异性结合，然后添加酶标记的抗球蛋白抗体（第二抗体是酶标记的抗体，如果血清是人血清，则将抗体添加到抗人抗体）。酶标记的抗抗体将与与已知固相抗原结合的*抗体结合，形成抗原-抗体-酶标记的第二抗体复合物，经过相同的保温和洗涤后，加入无色酶底物，保持一定时间进行酶反应，酶催化底物显色。观察反应后的颜色，判断反应结果。如果有显色反应，则表示测试样品含有相应的抗体，因此为阳性反应。也可以根据颜色深度进行定量分析。相反，如果它是无色的，则意味着样品中没有相应的抗体，这是一种负反应。
间接法操作步骤
1、包衣固体载体：用已知抗原包衣固体，形成固体抗原，洗涤除去未结合抗原和杂质；
2.阻断：用高浓度无关蛋白阻断，以防止待测血清中非特异性IgG的固相吸附；
3.加入待测样品：孵育（37℃，2h）后，将相应抗体与固相抗原结合。清洗以去除无关物质；
4.添加酶标抗抗体或酶标SPA：再次孵育（37℃，2h），使酶标抗与固相载体上的抗原抗体复合物结合；洗涤以除去未偶联酶标记的抗抗体；
5.底物显色：孵育（37℃，30min）；
6.终止反应的测定结果应通过目测定性确定，或通过使用微孔板读数器进行光密度测量进行定量分析。
间接法的方法评价
酶联免疫吸附试验（ELISA）是检测抗体最常用的方法，应用广泛，灵敏度高。酶标记抗体的应用可用于检测物种中各种抗原的相应抗体。
间接法的应用
间接ELISA主要用于检测抗体。该方法可用于检测：人类免疫缺陷病毒HIV（-1/2）抗体、丙型肝炎病毒抗体（抗-HCV）、戊型肝炎抗体（抗HEV）、庚型肝炎病毒（抗-HGV）等
丙型肝炎病毒检测适应症：用于检测血清或血浆中的丙型肝炎抗体，用于献血员筛查机的临床辅助诊断。原理如下：将HCV结构区核心蛋白和非结构区蛋白的混合抗原涂布在微带上，将样品加入固相抗原板。当样品中含有HCV特异性抗体（*抗体）时，抗体将特异性结合固相抗原，然后加入过氧化物酶标记的抗人（IgG），抗体将特异性结合固相抗原，酶标记抗体将与固相抗原结合的*抗体结合形成抗原-抗体-酶标记的第二抗体复合物，然后加入底物催化