类风湿因子检测
类风湿因子（RF）是类风湿性关节炎（RA）和其他疾病患者血清中的一种自身抗体。RF与变性IgG的Fc片段结合形成免疫复合物并沉积在关节腔内，激活补体并引起免疫病理损伤。
道德原则
将纯化的兔IgG涂布在微孔板上。加入稀释的待测血清后，如果血清中有RF，它与兔IgG形成复合物，与辣根过氧化物酶标记的山羊抗人IgM抗体结合。洗涤后，加入邻苯二胺显色。反应结束后，确定每个反应孔的A492值。从标准曲线中可以找到对应于样品吸光度值的血清IgM型RF浓度。
材料
抗原：兔IgG
微孔板
Parafilm公司
涂层缓冲液：碳酸盐缓冲液（50nmol/L，PH9.6）
包衣液：将兔IgG溶解在包衣缓冲液中，使最终浓度为100mg/L
洗涤液/稀释剂：含有0.05%吐温20的磷酸缓冲液（PBST）
密封溶液：含10%牛血清白蛋白的碳酸盐缓冲液（100g/L）
酶标记二级抗体：辣根过氧化物酶标记山羊抗人IgM
底物：邻苯二胺（OPD）
终止溶液：2mol/L H2SO4
待测血清的预处理：待测血清在56℃水浴中孵育30分钟，使补体失活
水浴箱
微板阅读器
操作步骤
1.在微孔板μL涂布液的测试孔中加入50，在37℃过夜时，在涂有缓冲液、密封膜和板的μL对照孔中仅加入50%。
2.PBST应至少清洗三次，每次3min。最后一次清洗后，应将孔内残留的清洗液倒置干燥。
3.每孔加入50μL密封溶液，37℃孵育1h。
4.同步步骤2中的清洗。
5.灭*清按1:10稀释，然后按1:4连续稀释5次，使血清稀释度从1:10至1:10 240。
6.在每个孔中加入50份稀释血清，μl，在4℃下孵育3h。
7.同步步骤2中的清洗。
8.每孔加入50μ。
9.同步步骤2中的清洗。
10.底物制备：将20mg OPD溶于pH 5.0的20ml柠檬酸缓冲液中，然后8μL30%H2O2，混合均匀。
11.每孔添加50μL。将底物在37℃黑暗中孵育30分钟。
12.每孔添加50μL停止溶液，用微孔板读数器测量A492值。
结果分析
同时，各反应板用参比血清按上述方法制作标准曲线。
通过每个样品的A值，可以从标准曲线中找到相应的血清RF浓度。
注意事项
1.兔IgG作为抗原与人IgG Fc片段作为抗原的检测结果无显著性差异。
2.加入终止溶液后，轻敲微孔板以确保均匀混合。
3.每个实验都需要阳性和阴性对照。