布鲁氏杆菌酶联抗体检测试剂盒

使用说明书

检测原理

    本试剂盒由预包被布鲁氏杆菌抗原的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法原理检测血清、血浆样本中布鲁氏杆菌抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有布鲁氏杆菌抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有布鲁氏杆菌抗体。

试剂盒组成

储存及有效期

2～8℃保存，有效期12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

适用仪器

含450nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水加1份浓缩洗涤液)。

检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性、阳性对照各1孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.样品孔先加入10ul待检样品，再加入90ul样品稀释液，充分振荡混匀。

4.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照100μl。

5.混匀，盖好盖板膜，置37℃温箱孵育30分钟。

6.甩去孔内液体，每孔加250ul工作洗涤液，用震荡混匀的方式洗涤60秒后弃去，重复洗涤5次，*后一次拍干液体。

7.每孔加酶标记物100μl，置37℃避光反应30分钟。

8.甩去孔内液体，每孔加250ul工作洗涤液，用震荡混匀的方式洗涤60秒后弃去，重复洗涤5次，*后一次拍干液体。

9.根据样品数量将显色液A与显色液B按等体积比例混匀配置为底物工作液，现配现用。每孔加100ul，置37℃避光反应10分钟。

10.每孔加终止液100μl，混匀，于450nm测定各孔吸光值（OD值）。

参考值

实验正常的情况下，阳性对照OD-阴性对照OD＞0.2。

检验结果的解释

1. S/P＝(样品OD-阴性对照OD)/(阳性对照OD-阴性对照OD)。

2. S/P≥0.4时结果判读为阳性。

3. 0.2＜S/P＜0.4时结果考虑可能存在抗体效价不足或疑似感染。

4. S/P＜0.2时结果判读为阴性。

试验方法的局限性

1. 本试剂盒仅作为定性检测样品中布鲁氏杆菌抗体的粗略评估。

2. 本试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验。

注意事项

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.用于检测的样品应保持新鲜。

6.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

7.底物显色过程中，若有整体显色速度过快的情况，可酌情缩短显色时间，显色时间*长不超过15分钟。

8.不同批号试剂组分不得混用。