牛布鲁氏杆菌抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

使用说明书

产品名称

通用名：牛布鲁氏杆菌抗体检测试剂盒（酶联免疫法）

包装规格

96T×1/盒

检测原理

    本试剂盒由预包被布鲁氏杆菌提取脂多糖的酶标板、酶标记物及其他配套试剂组成，应用酶联免疫法（ELISA）原理检测牛血清、血浆样本中布鲁氏杆菌抗体。实验时在酶标板中加入对照血清和待检样本，经温育后若样品中含有布鲁氏杆菌抗体，则将与酶标板上抗原结合，经洗涤除去未结合的其他成分后；再加入酶标记物，与酶标板上抗原抗体复合物发生特异性结合；再经洗涤除去未结合的酶标记物，在孔中加TMB底物液，与酶标结合物反应形成蓝色产物，显色深浅与样品中的特异性抗体含量成正相关；加入终止液终止反应后，产物变为黄色；用酶标仪在450nm波长测定各反应孔中的吸光值，即可知样品是否含有布鲁氏杆菌抗体。

试剂盒组成

储存及有效期

2～8℃保存，有效期12个月。

包被板开封后请于2～8℃避光保存，避免受潮。使用期限为2个月。

适用仪器

含450nm波长的酶标仪，37℃恒温设备，可调微量移液器。

样品准备

1.取动物全血按常规方法制备血清，要求血清清亮，无溶血、无污染。样品1周内可于2～8℃保存，长期需置-20℃保存。

2.根据样本数量准备对应数量的小刻度EP管或血清稀释盘，用样品稀释液将待检血清按50倍稀释（如4μl血清加入196μl样品稀释液中，混匀）阴性、阳性对照不用稀释。

3.浓缩洗涤液使用前应恢复至室温使沉淀溶解，然后用蒸馏水或去离子水作20倍稀释成工作洗涤液(如19份蒸馏水或去离子水加1份浓缩洗涤液)。

检验方法

1.使用前将试剂盒置室温30分钟，恢复至室温。

2.取所需用量酶标板条，设阴性、阳性对照各1孔，未用的板条尽快密封，2～8℃保存。

3.阴性、阳性对照孔分别加入阴性、阳性对照100μl；样品孔每孔加入稀释后的样品100μl。

4.混匀，盖好盖板膜，置37℃温箱孵育30分钟。

5.甩去孔内液体，每孔加250ul工作洗涤液，用震荡混匀的方式洗涤60秒后弃去，重复洗涤5次，每次洗涤后需拍干液体。

6.每孔加酶标记物100μl，置37℃避光反应30分钟。

7.甩去孔内液体，每孔加250ul工作洗涤液，用震荡混匀的方式洗涤60秒后弃去，重复洗涤5次，每次洗涤后需拍干液体。

8.根据样本数量将显色液A与显色液B按等体积比例混匀配置为底物工作液，现配现用。每孔加100ul，置37℃避光反应10分钟。

9.每孔加终止液100μl，混匀，于450nm 测定各孔吸光值（OD值），

参考值

实验正常的情况下，阳性对照OD-阴性对照OD＞0.2。

检验结果的解释

1. S/P＝(样本OD-阴性对照OD)/(阳性对照OD-阴性对照OD)。

2. S/P≥0.4时结果判读为阳性。

3. 0.2＜S/P＜0.4时结果为疑似阳性；若接种过对应疫苗，则提示抗体水平不足，建议补打疫苗。

4. S/P＜0.2时结果判读为阴性。

试验方法的局限性

1. 本试剂盒仅作为定性检测牛血清或血浆中布鲁氏杆菌毒抗体的粗略评估。

2. 本试剂盒仅供研究使用，不得用于临床实验或人体实验。

注意事项

1.实验操作时需戴手套、穿工作衣，严格健全和执行消毒隔离制度，各种实验废弃物都应按传染物处理。

2.终止液具有腐蚀性，应避免接触皮肤和衣物，如不慎接触请立即用大量自来水冲洗。

3.酶标板从冷藏环境中取出时应恢复至室温方可开袋，未用完的酶标板需放入有干燥剂的密封袋中保存。

4.浓缩洗涤液在低温时容易结晶，使用时需恢复至室温以完全溶解。

5.洗涤时各孔均需加满液体，防止孔口有游离酶不能洗净。

6.用于检测的样品应保持新鲜。

7.试验结果的判定必须以酶标仪读数为准。

8.不同批号试剂组分不得混用。

生产企业

企业名称：赛诺利康生物技术（北京）有限公司

电    话：010-80765002

传    真：010-58859364

邮    编：102218

网    址：http://www.sinorecabio.com

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